我们在实验过程中经常遇到这样的问题：

实验室新买了UHPLC,想要将原来的HPLC方法转移到新的机器上,却不知道该怎么着手？

在文献中查找到一个UHPLC建立的快速分析方法，如何将这个方法转移到仅有HPLC的实验室呢？

今天来为大家讲一讲，HPLC和UHPLC之间的方法转换时应该注意哪些问题？怎样来选择合适的捕鱼游戏单机破解大全 ？

主要内容

1. 方法转换中的不可变条件

2. 方法转换中的变化条件 

3. 方法转换中的基本调整规则

1. 方法转换中的不可变条件

在方法转换的时候，为了达到良好的分离情况，我们应该尽可能保持与HPLC分析方法中的主要分离条件一致。

(1) 在捕鱼游戏单机破解大全 中使用填料的性质和选择性应当相同。

(2) 使用的流动相组成（强洗脱有机溶剂、缓冲物组成、pH等）应该相同。

(3) 检测器的工作条件（检测波长）应该相同。

(4) 柱温应当相同。

2. 方法转换中的变化条件

方法转换的过程中，通常是通过更换与UHPLC系统相匹配的，具有相同分离性能的捕鱼游戏单机破解大全 规格，调整流速来提高分离效率。

以下几点是我们需要特别注意的地方。

(1) 填料的粒径由大变小。

(2) 捕鱼游戏单机破解大全 的内径由宽变窄。

(3) 捕鱼游戏单机破解大全 的长度由长变短。

(4) 捕鱼游戏单机破解大全 的压力降由低变高。

(5) 色谱仪系统的死体积和梯度滞留体积由大变小。

(6) 流动相的流速由大变小。

(7) 洗脱时间由长变短。

3. 方法转换中的基本调整规则

现在，大家已经了解 HPLC→UHPLC 方法转换时应该注意的可变条件和不可变条件了，那么具体怎么操作呢？

下面让我们通过一个例子来掌握这项实用的工作技能吧。

例如，一个HPLC分析方法，使用捕鱼游戏单机破解大全 的规格是 4.6mm×250mm×5um；流速为1mL/min,柱压为10Mpa,进样体积为10uL.

那么，如果换成粒径为2um的UHPLC柱，柱长、流速、压力、进样量该如何来选择呢？

我们可以按照下面的步骤逐步来计算：

调整步骤

柱长、粒径的选择

流速的调整

捕鱼游戏单机破解大全 的压力

进样量的调整

（1）捕鱼游戏单机破解大全 规格的调整

首先引入一个分离效能的概念：

Se=L/dp

式中，L为捕鱼游戏单机破解大全 的柱长,mm;dp为捕鱼游戏单机破解大全 粒径,um。

对于不同的捕鱼游戏单机破解大全 ，只要能保持柱长和粒径的比值相同，那么分离效果就是差不多的。

柱长的计算：

L2=L1×(dp2/dp1)

L2=250×(2/5)mm=100mm

根据以上计算结果，我们就可以选择规格为2.1mm×100mm×2um的CAPCELL PAK IF2 捕鱼游戏单机破解大全 了。

（2）流速的调整

我们还是利用上面这个例子，现在规格选好了，那么流速设置多少更合适呢？

流速的计算：

式中，F为流速，dc为捕鱼游戏单机破解大全 内径，dp为填料的粒径。

F2=1×(2.1/4.6)×(2.1/4.6)×(5/2)mL/min=0.52mL/min

根据以上计算结果，我们可以将流速设置为0.52mL/min.

（3）捕鱼游戏单机破解大全 的压力

柱压的计算一般使用下面的公式：

按上述计算方法，确定捕鱼游戏单机破解大全 规格和流速以后，在估算捕鱼游戏单机破解大全 的压力时，可以仅考虑填料粒径的影响，近似式为

式中，p为柱压。

p2=10×(5/2)×(5/2)Mpa=62.5Mpa

CAPCELL PAK  IF2 具有超高的耐压性能，耐压可达100Mpa，*符合替换要求。

（4）进样量的调整

对进样量的计算：

式中：Vinj 为进样量。

V2=10×(2.1/4.6)×(2.1/4.6)×(100/250)=0.83uL

在这里留个思考题：

捕鱼游戏单机破解大全 规格变化之后，为什么要调整进样量呢？

您可以根据自己试验的实际情况或检测限的要求来调整进样量。

这个开始看似很复杂的方法转换问题，经过我们一步一步地计算，是不是变得很简单了呢？

HPLC→UHPLC的转换结果

如果您现在正好有HPLC的项目，可以自己尝试转化成UHPLC方法，不仅可以提高分离效率，还能省下不少试剂呢！